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- 转化子名词解释?
- 制备单克隆抗体时先在什么条件下进行体外培养?
- 电转膜的原理?
转化子名词解释?
1、转化子就是掺入或导入外源DNA 后获得了新的遗传标志的细菌细胞或其他受体细胞。
受体菌直接吸收了来自供体菌的DNA片段,通过交换,把它组合到自己的基因组中,从而获得供体菌部分遗传性状的现象。
2、克隆子是将摄取外源DNA分子并能使该分子在其中稳定维持的受体细胞统称为克隆子。
3、重组子、阳性克隆子或期望重组子是含有重组DNA分子的克隆子被称为重组子,如果重组子中含有外源目的基因则又称为阳性克隆子或期望重组子 。
制备单克隆抗体时先在什么条件下进行体外培养?
制备过程 编辑 1、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。
一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫
注射。抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,***相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。2、细胞融合 ***用二氧化碳气体处死小鼠,无菌操作取出脾脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。将
准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合,形成
杂交瘤细胞。3、
选择性培养 选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞,一般***用HAT选择性培养基。在HAT培养基中,未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,
不能利用补救途径合成DNA而死亡。未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶,并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性,因此能在HAT培养基中存活和增殖。4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞,只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此,必须进行筛选和克隆化。通常***用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。***用灵敏、快速、特异的免疫学方法,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后,及时进行冻存。5、单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的大量制备重要***用动物体内诱生法和体外培养法。(1)体内诱生法 取Balb/c小鼠,首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预
处理。1-2周后,腹腔内
接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖,并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周,可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水,即可获得大量单克隆抗体。(2)体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中,杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体,收集培养上清液,离心去除细胞及其碎片,即可获得所
需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。各种新型培养
技术和装置不断出现,大大提高了抗体的
生产量。
电转膜的原理?
转膜实验原理与操作步骤
转膜是把DNA从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物(一般是尼龙膜)上固定,是进行各种后续研究(如 RFLP 分析,阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究)的前提。
实验目的:
掌握 Southern blotting 的原理及操作步骤
实验原理:
1. 转膜的方式:
向上的毛细管转移
向下的毛细管转移
同时向两张膜转移
电转移
到此,以上就是小编对于阳性克隆宠物零食的问题就介绍到这了,希望介绍关于阳性克隆宠物零食的3点解答对大家有用。